仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性

时间：2023-03-18 22:53:22 药学毕业论文我要投稿

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仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性

【关键词】 ,胰腺肿瘤
Establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer and its biologic characteristics
　　【Abstract】AIM: To establish an orthotopic model of hamster pancreatic cancer and to analyze its biologic characteristics. METHODS: Pancreatic cancer cell line pDHAM1 of hamster was inoculated under pancreatic membrane. At 7th, 14th, 21st, and 28th day, a group of 10 animals were sacrificed to observe the growth of orthotopic cancer, lymph nodes metastasis, liver metastasis and the quantity and quality of ascites. RESULTS: Orthotopic model of hamster pancreatic cancer had a high survival rate (95%) and grew rapidly. The orthotopic tumors were measured (16±6), (173±44), (369±87), (974±226) mm3 respectively at the 7th, 14th, 21st and 28th day. At the 21st day, cancer cells were observed in lymphatic capillaries and metastasis in some lymph nodes and hydremic ascites was detected. At the 28th day, the positivity rate of lymph nodes and the amount of bloody ascites increased. Liver metastasis was detected in some of the hamsters. CONCLUSION: The establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer cells pGHAM1 is simple and easily copied, and maintains the biologic characteristics of pancreatic carcinoma, which is an ideal research model of pancreatic carcinoma.
　　【Keywords】 pancreatic neoplasms; disease models, animal; mesocricetus
　　【摘要】目的：建立仓鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物学特性. 方法：将仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1接种于仓鼠胰腺背膜下，分别于第7, 14, 21, 28日各剖杀10只，肉眼及光学显微镜下观察原位肿瘤的生长、淋巴结转移及肝转移，同时观测腹水量. 结果：仓鼠胰腺癌原位模型成活率达95%，生长迅速. 接种后第7， 14， 21， 28日原位肿瘤大小分别为（16±6），（173±44），（369±87），（974±226） mm3. 第21日，毛细淋巴管内可见癌细胞团，部分淋巴结有癌细胞转移，可见少量淡血性腹水. 第28日，淋巴结阳性率进一步增加，可见血性腹水，量明显增多；部分仓鼠发生了肝转移. 结论：仓鼠胰腺癌细胞株 pGHAM1原位模型建立方法简便，易复制，而且肿瘤保持了胰腺癌的生物学特性，是理想的胰腺癌研究模型.

　　【关键词】胰腺肿瘤；疾病模型，动物；金仓鼠
　　0引言
　　胰腺癌是一种恶性程度高、预后极差的肿瘤［1］. 其原因是胰腺癌发病隐匿，很难早期诊断，而即便早期诊断，部分患者也已经发生肝脏转移、腹膜播散或者局部复发［2］. 基于为胰腺癌研究提供一个肿瘤的试验系统目的，已有大量胰腺癌动物模型建立，但很多是裸鼠模型. 在肿瘤研究方面，由于裸鼠没有正常的免疫系统，其发病机制可能与人有所不同［3］. 而叙利亚金色仓鼠在形态学、生物学以及免疫学等方面与人相似. 我们拟建立仓鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物学特性.
　　1材料和方法
　　1.1材料
　　雌性叙利亚金黄仓鼠40只，4～5周龄，纯近交系，体质量40～50 g，购自中国兰州生物制品研究所. 饲养条件：温度（22±3）℃，相对湿度为（40±5）%，光/暗周期为12 h/12 h，按照标准食物喂养，自由饮水；DMEM培养液为Gibcol BRL产品；胎牛血清购自杭州四季青生物工程公司.
　　1.2方法
　　1.2.1仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1的建立用甲硝二胺诱导叙利亚金黄色仓鼠胰腺导管癌［4］. 肿瘤组织用剪刀剪成1 mm×1 mm×1 mm并用套针植入仓鼠肩胛区皮下，6～8 wk后处死动物，切除肿瘤自治后反复继代种植，第8次种植后切除肿瘤组织，用0.5 g/L的胰蛋白酶消化，37℃下EDTA处理10 min, 1000 r/min离心10 min，收集细胞，于含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养液中培养，并加 100 U/L青霉素链霉素，100 mg/L卡那霉素以及100 mg/L两性霉素B，反复传代培养60代，建立pGHAM1细胞株.

　　1.2.2仓鼠胰腺癌原位模型的建立PGHAM1细胞株于DMEM培养液中稳定传代5~6代. 观察细胞增殖旺盛时终止培养，用无血清DMEM培养液制备细胞悬液，调整细胞密度至1×1010/L，备用. 以60 mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠，取腹部正中切口，牵出胰腺，于脾门较宽大处胰腺背膜下注射1×106/L PGHAM1细胞悬液后常规关腹. 于术后7, 14, 21, 28 d分别剖杀10只. 切除原位肿瘤，用测径器测量肿瘤大小，按公式V=π/6×长×宽×高计算肿瘤体积，同时观察腹水的质与量、有无淋巴结、大网膜、壁层腹膜及肝脏转移.

　　1.2.3病理学检查切除大网膜，平铺在蜡片上，“卷席法”处理大网膜标本；40/L甲醛固定原位肿瘤、壁层腹膜、肝脏及可疑淋巴结，石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜观察.
　2结果
　　2.1原位肿瘤及转移情况接种后第7日，可见胰内原发灶大小（16±6） mm3,

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