探研富血小板血浆在口腔组织再生中应用的影响因素
富血小板血浆(platelet—rich plasma，PRP)是从20世纪60年代用于止血治疗开始应用于临床，1998年Marx首次把PRP与自体髂骨结合应用于下颌骨缺损重建治疗中。目前，富血小板血浆定义为利用离心技术使得少量血浆中自体血小板浓缩，并通过凝血酶和CaC1，的激活使得血小板中的仪链释放其含有的生长因子和黏结蛋白，其同义词包括血小板凝胶、富生长因子血浆、富血小板纤维等。本文对PRP在口腔组织再生中应用的影响因素做一综述。
1 PRP
1.1 PRP中的生长因子和黏结蛋白储存于血小板a链中的生长因子包括血小板衍生生长因子 (platelet—derived growth factor PDGF)、转化生长因子B(transforming growth factorbeta，TGF.B)、血小板衍生血管生成因子(platelet—derived vascular growth factor，PAGF)、血小板衍生上皮生长因子(platelet—derived epidermal growthfactor， PDEGF)、l(insulingrowth factor一1，IGF一1)、血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)等。体外实验也证实PRP中还含有3种黏结蛋白， 即纤维蛋白原、纤维连接蛋白、玻璃粘连蛋白，这三种分子可作为骨或结缔组织的基质。也可作为细胞间的连接分子并以此起着骨诱导的作用。
1.2 PRP的制取方法
随着设备和技术的改进，目前各种PRP制取系统都是采用相类似的机制。其流程可简述为：
①一般从病人前臂静脉中采集少量全血(用于牙周组织再生治疗的全血量为8～10 mL.用于颌骨重建治疗的全血量为8～500 mL)。
② 低转数离心分离：分离出含血小板与红细胞的上清液及去血小板血浆(platelet poor plasma，PPP)，弃除去血小板血浆。
③ 高转数离心分离：红细胞与比重大的PRP分离，去红细胞。
④ 激活并形成凝胶状：添加自体或异体凝血酶和CaC12.
1.3 组织再生中PRP作用机制
富血小板血浆作用的发挥在于其所含的大量生长因子和蛋白在受区的持续性释放。这是冈为这些来自 链的多肽分子能够调控细胞的迁移、附着、增殖、分化.并通过与特定的细胞表面受体结合进而促进胞外基质的堆积，并以此能够模拟伤口的生理性愈合过程以及组织的修复过程嗍。基于这些理论，PRP能够促进移植物的内环境稳定性和黏结性，改善骨组织和软组织的愈合进而缩短术后愈合时间，此外还可以抵消移植物的吸收。
2 影响PRP在口腔组织再生中应用的因素
尽管理论上认为PRP有利于组织再生.但从现有的相关文章报道可以发现，有关PRP是否有利于口腔组织再生存在很大争议。在动物实验中，Jakse等在羊上颌窦提升模型中发现实验组(T)与对照组(C)的组织切片中新骨形成比例不存在显著差异(T：自体髂骨+PPR;C：自体髂骨);而Ohya等 在兔上颌窦提升模型中证实PRP促进骨形成; 国内学者何家才等在犬下颌骨种植周围缺损模型中也发现.实验组(TCP+PRP)的种植体骨结合率和新骨形成质量明显优于对照组(TCP+生理盐水)。在临床试验中，DOri等发现实验组(T)与对照组(C)问在临床附着水平上无显著差异(T：B—TCP+PRP;C：13一TCP)：Piemontese等证实PRP有助于临床附着水平的增加 通过对文献的回顾，我们发现影响PRP促口腔组织再生实验结果差异的因素可以归纳为两大类：第一类为与PRP相关的因素;第二类为与实验设计相关的因素。
2.1 与PRP相关的影响其作用的因素
2.1.1 PRP巾血小板浓度
Marx最早测算出PRP中血小板浓度平均较术前全血中增加了3.38倍。Weibrich等在比较PRP中血小板不同的浓度对成骨影响的实验巾发现，浓缩度在2～6倍时实验组与对照组在荧光标记的骨量上存在显著差异，但浓缩度在6～11倍时却显示有抑制成骨细胞活性的作用。Weibrich由此也提出当PRP中血小板计数在1×10 / I 时PRP呈现出最好的生物学作用。也有学者提出1x10e/t~L只是PRP促进组织愈合的最低适合度。目前，对于组织再生有良好临床作用的最佳血小板浓缩度仍不是很清楚.不过已经明确的是：PRP中血小板浓度较低其促组织再生作用将欠佳，如果浓度过高其促组织再生的作用将受抑制 。JlL~b，有学者认为基于最初全血中血小板数不同，PRP中血小板浓度也将随着变化。但是Weibrich通过实验发现，血小板数或生长因子水平在全血和PRP之间不存在相关性 。
2.1.2 PRP促组织再生作用的持续时间
由于血小板的半衰期仅为8～12 d，有学者提出PRP在早期有促进骨形成的作用，但随时间推移这种作用将会减弱或者消失[17.181：有实验结果支持此观点：@Thor等 1有关上颌窦提升术骨移植的成骨性实验发现，术后3个月PRP组与对照组在新骨形成量上存在明 差异.但在术后6个月两组问就已无显著差异;⑦Harnack等[羽有关PRP在牙周手术中应用的随机对照实验发现.伤口愈合指数在术后3 d时比较高，但从术后2周起开始下降。
2.1.3 制取PRP 的不同方法
早在2001年Zimmermann等通过实验发现，PRP中血小板浓度随不同制取方法而存在明显差异。Weibrich等f6l认为目前PRP制取方法大致分为梯度密度细胞分离法和‘uffv coat’(白细胞层)法，并指出与 uffv coat’(白细胞层)法相比梯度密度细胞分离法产生的血小板数多，生长因子水平高。Weibrich等 比较了PCCS (浓缩血小板采集系统，platelet concentrationc0liection system)与Curasan(eurasan PRP kit)两种不同的PRP制取系统，并发现PCCS系统产生的血小板数更多，TGF—B与IGF I的浓度更高。
2.1.4 PRP的激活物—— 凝血酶
目前，用于PRP激活的凝血酶主要为两种来源：一种为自体获取的人凝血酶：另一种为异种来源的凝血酶，多为牛凝血酶。Su等 分别用人凝血酶和牛凝血酶来制备PRP胶.发现使用人凝血酶制成的PRP其PDGF和TGF浓度高于用牛凝血酶制成的。
2.1.5 PRP生长凶子的双重性作用
PDGF和TGF.B都具有刺激或抑制成骨细胞的作用。此外由于PRP内含多种多肽类因子，每个因子对同一组织都有着不同的作用或应答，并相互作用，进而形成多种信号分子级联表达途径，最终导致基因的表达和蛋白形成。在一动物模型中，虽然TGF.p在PDGF的激活下被释放，但在组织学中并没有发现纤维组织的形成。