达坂盐湖沉积土壤嗜盐细菌的多样性分析及钠离子输出相关基因的克
论文摘要: 嗜盐菌由于具有广泛的环境（略）系统发育多样性、独特的耐盐机制和潜在应用价值,近年来受到科学界的广泛关注.本研究以新疆达坂盐湖沉积土壤为实验材料,对新疆达坂盐湖的嗜盐细菌进行多样性分析,并从中克隆获得1个新的钠离子输出相关基因.主要研究结论如下: 以选择性富集培养获得的嗜盐细菌基因组DNA为模板,扩增16S rRNA基因,在此（略）盐细菌的16S rRNA基因文库,随机挑选文库中的100个阳性克隆子进行群落结构多样性分析.16S rRNA基因序列分析结果表明:100个克隆分属于细菌域9个属的27个种,其中芽（略）cillus)为优势菌群(48%),喜盐芽孢杆菌(Halobacillus) (14%)、嗜盐单胞菌(Halomonas) (13%)为次优势菌群.分析的阳性克隆子中（略）子与GenBank中已报道16S rRNA基因序列的相似性在88.80%到96.90%之间,可能代表新属或新种.研究结果表明,新疆达坂盐湖沉积土壤的富集培养物中存在种类较为丰富的嗜盐细菌. 以大肠杆菌Na+/H+逆向转运蛋白基因缺陷株Escheric（略）li KNabc为宿主,...
Halophiles living in high-salt environment, due to a wide diversity of environmental（omitted）n, phylogenetic diversity, uniqu（omitted）erance mechanisms and potential applica-tions in recent years widespread attention by the scientific community. In this study, Daban（omitted） in Xinjiang as materials deposited s（omitted）er to obtain directional halophilic microorganisms enriched total DNA as a template of the Daban salt（omitted）injiang diversity of halophilic bacteria, and a new sodium ion output ...
目录:摘要 第4-5页
Abstract 第5页
目录 第6-9页
1 序言 第9-26页
·极端微生物简介 第9-11页
·极端微生物的主要生物类群 第9-10页
·嗜热微生物和嗜冷微生物 第9页
·嗜酸微生物和嗜碱微生物 第9-10页
·嗜盐微生物 第10页
·嗜压微生物 第10页
·极端微生物的应用 第10-11页
·嗜盐菌的研究概况 第11-16页
·嗜盐菌的定义和分类 第11-12页
·嗜盐菌栖息的盐域环境 第12页
·嗜盐古菌的研究历史 第12页
·中度嗜盐菌的研究历史 第12-13页
·嗜盐菌的研究热点 第13-16页
·嗜盐菌的分类学 第13页
·嗜盐菌的系统发育多样性 第13-14页
·嗜盐菌的应用 第14-16页
·嗜盐菌的生理学 第16页
·嗜盐微生物的盐适应机制 第16-23页
·通过提高胞质缓冲力来适应高盐环境 第17页
·次级钠泵系统 第17-23页
·大肠杆菌中的Na~+/H~+逆向转运蛋白 第17-20页
·耐盐菌和嗜盐菌中的Na~+/H~+逆向转运蛋白 第20-21页
·嗜碱菌中的Na~+/H~+逆向转运蛋白 第21页
·其它类型微生物中的Na~+/H~+逆向转运蛋白 第21-22页
·NhaD Na~+/H~+逆向转运蛋白 第22-23页
·Na~+/H~+逆向转运蛋白的应用前景 第23页
·微生物Na~+/H~+逆向转运蛋白亟待研究的问题 第23-24页
·本研究的指导思想、目的和意义 第24页
·本研究的技术路线 第24-26页
2 新疆达坂盐湖沉积土壤嗜盐细菌的多样性分析 第26-37页
·材料和方法 第26-31页
·样品的采集和处理 第26页
·主要仪器和实验用品 第26页
·菌株和载体 第26页
·培养基 第26-27页
·主要试剂 第27页
·DNA提取试剂 第27页
·电泳相关缓冲液 第27页
·实验方法 第27-31页
·嗜盐菌的定向富集 第27-28页
·总基因组DNA的提取与纯化 第28页
·DNA浓度和纯度的测定 第28页
·PCR反应体系和条件 第28-29页
·PCR产物的纯化 第29页
·连接 第29-30页
·热激感受态的制备 第30页
·热激转化 第30页
·菌落PCR 第30页
·DNA序列测定 第30页
·S rRNA的系统发育分析 第30-31页
·核苷酸序列登录号 第31页
·结果与分析 第31-36页
·总基因组DNA的提取 第31页
·嗜盐富集培养物16S rRNA基因多样性及其系统发育分析 第31-36页
·嗜盐富集培养物16S rRNA基因系列扩增 第31-32页
·嗜盐富集培养物16S rRNA基因克隆文库的构建与多样性分析 第32-36页
·讨论 第36-37页
3 微生物钠离子输出相关基因的克隆与功能研究 第37-55页
·材料与方法 第37-43页
·样品的采集和处理 第37页
·菌株、质粒和引物 第37-38页
·主要仪器和实验用品 第38页
·培养基 第38页
·碱法提取质粒所需主要试剂 第38页
·实验方法 第38-43页
·总基因组DNA提取、纯化及浓度测定 第38页
·总基因组DNA的部分酶切 第38-39页
·载体的酶切和去磷酸化 第39页
·载体与总基因组DNA部分酶切片段的连接 第39-40页
·连接产物纯化 第40页
·电转化感受态细胞的制备 第40-41页
·电激转化 第41页
·质粒的快速检测 第41页
·质粒提取 第41-42页
·钠离子输出相关基因的亚克隆 第42-43页
·基因序列的生物信息学分析 第43页
·重组子在不同条件下的生长能力测试 第43页
·结果和分析 第43-53页
·总基因组DNA的部分酶切 第43-44页
·阳性克隆子的筛选 第44页
·重组质粒携带外源基因的序列分析 第44-51页
·Na~+输出相关基因的亚克隆 第51-52页
·E.coli KNabc/pMDtetR-smrL的耐盐性实验 第52页
·E.coli KNabc/pMDtetR-smrL对碱性pH的抗性 第52-53页
·讨论 第53-55页
结论 第55-56页
参考文献 第56-65页
缩略词一览表 第65-66页
致谢 第66-67页
项目资助与论文发表情况 第67页
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