探析不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定

时间:2020-10-08 17:34:29 药学毕业论文 我要投稿

探析不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定

摘要:目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法,以甲醇-水(32∶68)为流动相,检测波长为250 nm测葛根素含量;紫外分光光度法测柴葛、粉葛中总黄酮含量。结果葛根素峰分离度提高,峰形改善;葛根素0.204~2.04 μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),回收率为98.7%(n=5),精密度RSD=0.86%。总黄酮浓度在4.08~16.32 μg/ml范围内与吸收度线性关系良好(r=0.999 8)。结论该法灵敏、准确、简便易行,重复性好,可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。

关键词: 柴葛 粉葛 葛根素 总黄酮 高效液相色谱
 
  葛根为豆科植物柴葛Pueraria lobata (Willd. )Ohwi 和甘葛藤Pueraria thomsonii Bent h. 的干燥根,前者习称柴葛,甘葛藤习称“粉葛”[1],始载于《神农本草经》,味甘、辛,性平,具有增加脑及冠状动脉血流量、降低血管阻力、收缩平滑肌、降血糖及解热等多种功效[2]。民间用于治疗伤寒、温热头痛、烦热消渴等症,也是中医常用的祛风解毒药。现代研究表明,葛根含葛根异黄酮,主要为葛根素(perarin) 、大豆苷(daidzin) 、大豆苷元(daidzein) 3种活性成分,其中葛根素是本属的特征成分,也是主要成分,为了对葛根进行有效的质量控制,本实验以葛根素为指标,以柴葛、粉葛药材为对象,建立了高效液相色谱法测定其葛根素的含量方法,并采用紫外分光光度法对其中的总黄酮进行了含量测定,为柴葛、粉葛的'药材鉴定提供参考方法。
  1 仪器与材料
  1.1 仪器美国 Waters 公司600-2487高效液相色谱仪,Millenium数据处理系统;Waters2487紫外检测器;岛津UV-2401PC型紫外分光光度计;岛津AY120型万分之一电子分析天平;SB3200型超声清洗器。
  1.2 材料葛根素对照品:中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯;水为重蒸馏超纯水;其它试剂均为分析纯。柴葛产于安徽岳西,粉葛产于广西。
  2 方法与结果
  2.1 HPLC法测定葛根中葛根素的含量
  2.1.1 色谱条件色谱柱:Zorbax XDB-C18(4. 6 mm ×250 mm , 5 μm);流动相∶甲醇-水(32∶68);流速1 ml/min;检测波长250 nm;柱温22℃;进样体积10μl。理论板数按葛根素峰计算不低于5000。在该色谱条件下,样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离,保留时间在14.3 min左右,对照品与样品的色谱图见图1。
  图1 对照品Ⅰ、柴葛索氏提取Ⅱ、粉葛索氏提取Ⅲ的HPLC色谱图(略)
  2.1.2 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25 ml量瓶。分别移取0.5,1.0,2.0,2.5 ml于5 ml量瓶,水定容,与原液共同作为HPLC用对照品溶液。
  2.1.3 供试品溶液的制备

  热回流提取法:精密称取柴葛、粉葛粉末(过50目筛)各0.1 g,置具塞锥形瓶中,精密加入30%乙醇50 ml,称重。回流提取30 min,放冷,称重并以30%乙醇补足减失重量,摇匀过滤,取续滤液为供试品,待测。

  索氏提取法:称取柴葛、粉葛粉末各0.5 g, 精密称定,以甲醇为提取剂提取4h,过滤,浓缩提取液并用甲醇定容于10 ml量瓶。超声处理30min,取上清液以水定容于10 ml量瓶,待测。
 2.1.4 线性关系考察取对照品溶液,按照“2.1.1”色谱条件进样10 μl,葛根素进样量X(μg)为横坐标,以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线,其回归方程为:Y= 3.507 6×106X 3.274 5×104,r = 0.999 9。结果表明,葛根素进样量在0.204~2.04μg范围内与峰面积线性关系良好,可用外标两点法计算含量。
  2.1.5 精密度考察在“2.1.1”项色谱条件下,吸取同一对照品溶液10 μl,连续进样5次,测得峰面积,RSD=0.8%,表明进样与峰面积积分的精密度良好。
  2.1.6 重复性考察取同一批柴葛、粉葛样品5份,按“2.1.3”项下的方法制样后,以“2.1.1”项色谱条件进样10 μl,测定葛根素的峰面积,按外标法计算含量,RSD=2.8%,表明分析方法重复性良好。